2025-07-02 04:20:51
放入 PCR 儀:將配置好的反應(yīng)管放入基因擴(kuò)增儀 PCR 儀中,按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。設(shè)置擴(kuò)增程序:一般包括預(yù)變性、變性、退火、延伸和終延伸等步驟。預(yù)變性步驟通常在 94℃-95℃下進(jìn)行 5-10 分鐘,使 DNA 雙鏈充分解開(kāi);變性溫度一般為 94℃-95℃,時(shí)間為 30-60 秒,使模板 DNA 雙鏈解鏈;退火溫度根據(jù)引物的 Tm 值確定,一般在 50℃-65℃之間,時(shí)間為 30-60 秒,使引物與模板 DNA 特異性結(jié)合;延伸溫度通常為 72℃,時(shí)間根據(jù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度而定,一般為 1-2 分鐘 /kb;終延伸步驟在 72℃下進(jìn)行 5-10 分鐘,確保所有擴(kuò)增產(chǎn)物延伸完整。循環(huán)次數(shù)一般為 30-40 次。Q9604充分考慮了用戶的需求,直觀的操作界面和簡(jiǎn)便的程序設(shè)置,降低了實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜性,提高了數(shù)據(jù)的可靠性。南京雙槽基因擴(kuò)增儀PCR儀要多少錢
1. **參數(shù)溫度均勻性:各孔位溫度差異≤0.5℃,避免擴(kuò)增效率不一致。熱循環(huán)重復(fù)性:多次運(yùn)行同一程序時(shí),溫度曲線重合度高,保證實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。兼容性:支持不同規(guī)格反應(yīng)管(如 0.2mL 管、96 孔板)和試劑體系(如 Taq 酶、高保真酶)。2. 選型建議科研場(chǎng)景:梯度 PCR 儀 + 低通量模塊,便于優(yōu)化反應(yīng)條件。臨床檢測(cè):高通量普通 PCR 儀或 qPCR 儀,兼顧效率和定量需求。野外或現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè):便攜式 PCR 儀(如基于微流控芯片,電池供電),適合應(yīng)急檢測(cè)(如**防控)。南京定量基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格基因組學(xué)和分子生物學(xué)研究不斷深入,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的需求持續(xù)增加,成為高通量基因檢測(cè)的理想選擇。
科研與分子生物學(xué)基因表達(dá)譜分析應(yīng)用:通過(guò) RT-PCR 同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因在不同樣本中的表達(dá)差異(如**組織芯片研究)。高通量測(cè)序文庫(kù)制備應(yīng)用:擴(kuò)增 DN**段用于二代測(cè)序(NGS)建庫(kù),提升測(cè)序前處理效率。3. 農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)轉(zhuǎn)基因作物批量檢測(cè)應(yīng)用:同時(shí)篩查多種作物樣本的外源基因(如抗蟲(chóng)基因Bt),符合監(jiān)管機(jī)構(gòu)的高通量檢測(cè)需求。畜禽疫病快速篩查應(yīng)用:批量檢測(cè)生豬、禽類的病原體(如非洲豬瘟病毒、禽流感病毒),助力養(yǎng)殖場(chǎng)疫病防控。
準(zhǔn)備試劑:準(zhǔn)備 PCR 反應(yīng)所需的各種試劑,包括 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、緩沖液、引物、Mg??等。引物是決定 PCR 特異性的關(guān)鍵因素,需根據(jù)待檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因成分的特定基因序列設(shè)計(jì)合成特異性引物。配置反應(yīng)液:按照一定的比例和順序,將各種試劑加入到無(wú)菌的 PCR 管中,配置成 PCR 反應(yīng)體系。一般反應(yīng)體系包括 10×PCR 緩沖液、2.5mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl?、10μmol/L 引物、5U/μL Taq DNA 聚合酶以及適量的模板 DNA,總體積通常為 20μL 或 50μL。RePure-A的智能故障檢測(cè)和報(bào)警系統(tǒng),能夠及時(shí)提醒用戶在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的問(wèn)題,確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程順利進(jìn)行。
在基因功能、調(diào)控機(jī)制等基礎(chǔ)研究中,qPCR是不可或缺的工具,主要用于基因表達(dá)水平的定量分析?;虮磉_(dá)分析:通過(guò)定量比較不同組織、不同發(fā)育階段或不同處理?xiàng)l件下目的基因的mRNA表達(dá)量,探究基因的功能及調(diào)控機(jī)制。例如,研究某種藥物對(duì)細(xì)胞中特定基因表達(dá)的影響,或比較正常組織與病變組織中基因表達(dá)的差異?;蚍中团cSNP分析:結(jié)合特異性探針或引物,可對(duì)單核苷酸多態(tài)性(SNP)進(jìn)行快速分型,用于研究基因多態(tài)性與疾病易感性、藥物反應(yīng)差異等的關(guān)聯(lián)?;蚩截悢?shù)變異(CNV)分析:檢測(cè)基因組中特定基因的拷貝數(shù)是否異常,為研究染色體結(jié)構(gòu)變異與疾病的關(guān)系提供數(shù)據(jù)支持。RePure-T配備了三槽設(shè)計(jì),允許用戶在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)反應(yīng)。南京QPCR基因擴(kuò)增儀PCR儀功能
擴(kuò)增效果出色的柏恒RePure系列PCR儀能高度靈敏地?cái)U(kuò)增目標(biāo)DNA序列,為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性提供保障。南京雙槽基因擴(kuò)增儀PCR儀要多少錢
儀器操作設(shè)置放置樣品板:將密封好的 96 孔板平穩(wěn)放入 qPCR 儀的樣品槽,確保孔位對(duì)齊,蓋緊儀器艙門。程序設(shè)置(通過(guò)儀器軟件):預(yù)變性:通常 95℃,30 秒 - 5 分鐘(熱啟動(dòng)酶,使模板完全變性)。循環(huán)階段(變性→退火→延伸,同時(shí)采集熒光):變性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解鏈)。退火 / 延伸:根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置溫度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物結(jié)合并延伸,熒光染料 / 探針在此階段發(fā)光)。循環(huán)次數(shù):通常 35-40 次(根據(jù)模板濃度調(diào)整)。溶解曲線(可選):用于驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性,程序?yàn)?95℃ 15 秒→60℃ 1 分鐘→緩慢升溫至 95℃,同時(shí)連續(xù)采集熒光(觀察是否有單一峰,排除非特異性擴(kuò)增或引物二聚體)。熒光通道選擇:根據(jù)使用的熒光染料 / 探針類型選擇(如 SYBR GreenⅠ 對(duì)應(yīng) FAM 通道,TaqMan 探針根據(jù)標(biāo)記熒光選擇)。樣本信息錄入:在軟件中標(biāo)記樣品類型(如標(biāo)準(zhǔn)品、未知樣本、陰性對(duì)照、空白對(duì)照)及孔位對(duì)應(yīng)關(guān)系。南京雙槽基因擴(kuò)增儀PCR儀要多少錢